使用image Pro plus 6.0分析细胞油红O染色结果计数/计算面积百分比 |
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前言油红O染色简单步骤image Pro plus 6.0下载链接使用image Pro plus 6.0分析油红染色
前言
自己做实验需要给细胞脂滴染色,在网上找资料摸索找到的一些内容,能够快速方便的计算油红O染色后的脂滴数量以及占面积百分比,简单总结一下,如果有问题或者建议欢迎一起交流学习~ 油红O染色简单步骤我自己这次使用的六孔板,第一次做乳腺上皮细胞,直接用的师兄给的油红O染液(结果工作液状态太久可能失效了,也可能是细胞本身原因脂滴分泌不明显),实验失败了,但还是练手了后面分析过程记录下来 染色步骤:参考细胞油红o染色 用枪头吸出培养液,加入2mL PBS轻轻晃动漂洗,吸出PBS弃掉每孔加入2mL 95%酒精(使用多聚甲醛固定更好,我直接用的细胞间现成的酒精),固定30min,固定的是细胞膜(吸一个孔加一个孔,防止孔内变干,脂滴破裂)固定过程中准备染色液:将【油红储存液:去离子水=3:2稀释】(储存液为:0.5g油红干粉,溶于少量异丙醇中,然后加异丙醇至100ml,棕色瓶密封(或锡箔纸包裹避光)4℃保存,为储存液,可长期保存),这次使用的为师兄已经配制好的工作液,无需稀释,直接用0.45μm滤器过滤(细胞间滤器好找,滤纸不方便,开头试了70μm细胞滤网发现不行,还是有沉淀)滤至15mL离心管内,备用(过滤是为了防止油红染料颗粒污染背景,看起来脏)吸出95%酒精固定液,每个孔加入1mL染色液(吸一个孔加一个孔),室温染色15min左右苏木精复染步骤 染色完成后,60%异丙醇漂洗,每孔2mL,除去多余染料以及背景残留(调色,可显微镜下观察用60%异丙醇浸染到细胞质胞浆无色即可)取1mL苏木精染料复染5min左右,条件有限的话油红染料和苏木精染料都可回收使用脱色步骤 使用60%异丙醇漂洗或者75%酒精或者PBS漂洗都可以我使用的六孔板,不需要长期保存,做完就扔,也就不需要像传统切片一样甘油封片显微镜观察 image Pro plus 6.0下载链接image Pro plus 6.0免安装版 学习用,误传播,24h侵删。资源来自各种学习资源这一微信公众号,感谢! 使用image Pro plus 6.0分析油红染色双击打开软件选择Complete 导入染完色拍到的图片,我这里因为之前说了失败了,就在网上找了下面张做演示 在这里插入图片描述 点击计数和测量对象,弹出如下对话框 在弹出对话框中选择如下Automatic Bright Objects,然后点击Measure项中选择Select Measurements 在弹出的Select Measurements对话框中选择Per Area(Obj./Total)后单击OK 回到Count/Size界面后选择Manual,然后点击后面的Select Colors…选项 在弹出的Segmentation对话框中选择Color Cube Based选项,接着点击取色器标识,将鼠标移到导入图片的红色脂滴上,选取红色(如果你要计数其他颜色同理),此时导入的图片上相同颜色都会被高亮显示(按需选取颜色直至大部分脂滴被标记上),接着点击Close关闭对话框 在该对话框中点击Count计数 接着点击View下的Statistic 即能看到分析结果 参考资料: 细胞油红o染色 实验必备技能,一看就会的油红染色指南 |
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